PCR實驗方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μ進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

技術服務內(nèi)容：

實驗步驟包括RNA提取、反轉錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對表達量。

特點優(yōu)勢：
1. 特異性：綿羊病毒2型PCR檢測試劑盒供應使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實現(xiàn)對細菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測，當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時，可實現(xiàn)對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種及腸道致病菌，可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。
5.   優(yōu)勢1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證，確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

2-(2,2-Dimethyl-1,3-dioxolan-4-yl)propane-1,2-diol  129141-48-6  中文名：  分子式：C8H16O4  度：98.0%  關鍵詞：  植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫  小鼠胱天蛋白酶8(Casp-8)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

1-Testosterone  1965/6/5  中文名：1-睪酮  分子式：C19H28O2  度：98.0%  關鍵詞：    小鼠胱天蛋白酶3(Casp-3)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝        

1-O-Methylnataloe-emodin  103392-51-4  中文名：  分子式：C16H12O5  度：98.0%  關鍵詞：  植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫  小鼠固   英文名稱：   Aldosterone   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   ALD

1-Naphthol  90-15-3  中文名：  分子式：C10H8O  度：96.0%      小鼠白蛋白   英文名稱：   Albumin   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   ALB

1-Monopalmitin  542-44-9  中文名：1-棕櫚酸單甘油酯  分子式：C19H38O4  度：98.0%  關鍵詞：  中藥對照品; 中藥標準品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫  小鼠乙酰輔酶A羧化酶   英文名稱：   Mouse Acetyl Coenzyme A Carboxylase   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   ACC
L-Isoleucine   50g                 Vildagliptin  274901-16-5  中文名：維達列汀  分子式：C17H25N3O2 

Lipopolysaccharides,Escherichiacoli055:B5  Vildagliptin  中文名：維達列汀  分子式：C17H25N3O2 

Lectin,fromiticumvulgaris                    Trenbolone heptanoate  N  中文名：  分子式：C25H34O3 

Lectin,fromArachisHypogaea(pean)  Trenbolone heptanoate  中文名：  分子式：C25H34O3 

Kisser封片液   10ml  Anthraquinone  中文名：蒽醌  分子式：C14H8O2  度：98.0%
綿羊病毒2型PCR檢測試劑盒供應家貓肺細胞;FCA-L1 羊膜細胞，Ha Fe細胞 BaF3細胞，小鼠原B細胞株香蜂草苷(標準品)質量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品Isosakuranetin 7-O-rutinoside

人正常上皮細胞;MCF 10A鹽酸萘替芬（標準品）質量規(guī)格：含量測定Naftifine Hydrochloride

PRLR Others Mouse 小鼠 PRLR / Prolactin Receptor 人細胞裂解液 (陽性對照) 碳酸鈣（標準品）質量規(guī)格：含量測定Calcium carbonate

原代神經(jīng)元細胞特制基礎培養(yǎng)基Many types of cells包裝：500/250/100ml甲磺酸氨氯地平（標準品）質量規(guī)格：含量測定Amlodipine mesylate

CD40LG Others Human 人 CD40L / CD154 / TNFSF5 人細胞裂解液 (陽性對照) 曲克蘆丁（標準品）質量規(guī)格：HPLC法含量測定Troxerutin
CDNF Others Mouse 小鼠 CDNF / ARMETL1 人細胞裂解液 (陽性對照) 對錄本酸，英文名或英文縮寫：PCBA，級別：BR，99%，規(guī)格：50毫克

人結直腸腺癌細胞;COLO 320DM [COLO320DM](-)-二異蒎基錄硼完 (-)-Diisopinoccmphqyl chloroborcnq 82116-37-6

CCDC47 Others Human 人 CCDC47 人細胞裂解液 (陽性對照) L-(+)-本甘安醋 L-Phqnylglycinq 932-32-2

人肝動脈平滑肌細胞完全培養(yǎng)基 100mLxlonofonm:ISOAMYLALCOHOL24:1錄仿:異 24:1生物技術級950MLRT

P815細胞，小鼠肥大細胞癌細胞 V79-4(中國倉鼠肺細胞) 非洲綠猴腎細胞系/HCV-C;Vero-HCV-CN-芴甲氧羰酰基-D-色酸NA
反應五要素：
參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應的關鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結構，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個堿基，應嚴格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。