PCR實驗方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μ進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

技術服務內容：

實驗步驟包括RNA提取、反轉錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對表達量。

特點優勢：
1. 特異性：豬腸道杯狀病毒PCR檢測試劑盒直銷使用的引物均經過詳盡的生物信息學分析，經過GenBank及自建龐大數據庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區段，可實現對細菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達到100%。
 2.   重現性：該系列所有產品均經過大量實驗菌株的驗證，重現性為100%。
3.   靈敏性：該系列產品可實現對檢測菌的高靈敏檢測，當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時，可實現對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種及腸道致病菌，可實現對臨床樣品及其他環境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。
5.   優勢1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優勢2：該系列試劑盒均經過大量的保守性及特異性實驗驗證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證，確保在使用過程中不會出現任何的假陽性及假陰性報告結果。本產品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

2-Methylsulfanylpyrimidin-4(3H)-one  5751-20-2  中文名：  分子式：C5H6N2OS  度：98.0%  關鍵詞：    小鼠可溶性E-選擇素(mouse sE-Selectin/sCD62E)   作用：   ELISA   規格：   48T/96T   進口分裝  

2-Methylanthraquinone  84-54-8  中文名：2-甲基蒽醌  分子式：C15H10O2  度：98.0%  關鍵詞：    小鼠基質金屬蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

2-Methyl-4-nitrobenzoic acid  1975-51-5  中文名：  分子式：C8H7NO4  度：98.0%  關鍵詞：    小鼠基質金屬蛋白酶9/明膠酶B(MMP-9/GelatinaseB)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

2-Methyl-4-(2-methylbenzoylamino)benzoic acid  317374-08-6  中文名：  分子式：C16H15NO3  度：98.0%  關鍵詞：    小鼠基質金屬蛋白酶8/中性粒細胞膠原酶(MMP-8)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

2-Methoxystypandrone  85122-21-0  中文名：  分子式：C14H12O5  度：98.0%  關鍵詞：  虎杖; 萘醌; 中藥對照品; 中藥標準品; 植物提取物; 天然產物; 天然產物庫  小鼠基質金屬蛋白酶7(MMP-7)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝
堿性蛋白酶測試盒   可見分光光度法   50管/24樣  Tetracaine   中文名：鹽酸丁卡因  分子式：C15H25ClN2O2 

堿性成纖維生長因子   英文名稱：   basic fibroblast growth factor   規格：   48T/96T   英文縮寫：   b-FGF  4,4'-Bis(diethylamino)benzophenone  90-93-7  中文名：四乙基米氏酮  分子式：C21H28N2O 

堿性0酸酶（AKP）檢測   Acid phosphatase (ACP) detection  Polypodine B  中文名：水龍骨甾酮B  分子式：C27H44O8 

甲狀腺球蛋白抗體   英文名稱：   Human Thyroglobulin Aibody   規格：   48T/96T   英文縮寫：   TGAb  Pefloxacin mesylate  70458-95-6  中文名：甲磺酸培氟沙星  分子式：C18H24FN3O6S 

甲型H5N1   英文名稱：   Influenza A H5N1(Avian Flu) HA   規格：   48T/96T   英文縮寫：   H5N1 HA  Prosapogenin A  19057-67-1  中文名：薯蕷次皂苷A  分子式：C39H62O12  度：%  關鍵詞：  細胞毒活性; 麥冬; 螺甾烷; 甾苷; 中藥對照品; 中藥標準品; 植物提取物; 天然產物; 天然產物庫
豬腸道杯狀病毒PCR檢測試劑盒直銷TNFRSF17 Others Human 人 TNFRSF17 / BCMA / CD269 人細胞裂解液 (陽性對照) 黃芪多糖(50%)質量規格：>50%2-(Chloromethyl)-4-(4-Nitrophenyl)-1,3-thiazole

小鼠胚胎成纖維細胞;3T6-Swiss albino黃芪多糖(30%)質量規格：>30%2-(Chloromethyl)-4-(4-Nitrophenyl)-1,3-thiazole

SAE1 Others Human 人 SAE1 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 3-奎寧環酮鹽酸鹽質量規格：>98%3-Quinuclidinone HCl

QGY-7701, 人細胞伊索拉定質量規格：≥99%,BRIrsogladine

NSC，大鼠神經干細胞 人腦視神經細胞，Hs 683細胞 RF/6A(猴脈絡膜-視網膜(內皮)細胞)黃柏酮（標準品）質量規格：HPLC≥98%，標準品Obacunone
PDIA4 Others Human 人 ERP72 / PDIA4 人細胞裂解液 (陽性對照) Camphore2-莰酮100克CP，96%

C57BL/6小鼠骨髓間質干細胞 C57BL/6 mouse bone marrow mesenchymal stem cells芐基三基錄化銨;三基下基錄化銨 BqnzyltriMqthylcMMoniuM chloridq 26-93-9

HME6細胞，人色素瘤細胞 動物雙歧桿菌 EB病毒轉化的人B細胞;KMY0919 10B Naphthol Blue Black (for electrophores... 1064-48-8 5G 染色劑

UMR-106(大鼠細胞) 5×106cells/瓶×24-(對硝基本偶氮)-1-奈酚，英文名或英文縮寫：4-(4-nitnopxenylazo)-1-naphthol，級別：高，50%，規格：5克

Hut-102(人皮膚T瘤細胞) 5×106cells/瓶×2 SKOV3/Taxol-25, 人紫杉醇耐藥細胞株 EB病毒轉化的人B細胞;KMY1022MacerozymeR-10 1g/5g/10g/100g原裝 Yakult.JAPAN
反應五要素：
參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應的關鍵，PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現非特異條帶。ATGC*隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內部出現二級結構，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數*個堿基，應嚴格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產生所需要的結果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。