PCR實驗方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實驗步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對表達(dá)量。

特點優(yōu)勢：
1. 特異性：皺褶青霉PCR檢測試劑盒說明書使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實現(xiàn)對細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達(dá)到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時，可實現(xiàn)對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌，可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。
5.   優(yōu)勢1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗證，確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

2-Amino-2'-chloro-5-nitro benzophenone  中文名：2-氨基-5-硝基-2'-氯二苯甲酮  分子式：C13H9ClN2O3    內(nèi)皮生長因子D   英文名稱：   vascuiar endothelial growth factor D   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   VEGF-D

2-Amino-2',5-dichlorobenzophenone  中文名：2-氨基-2',5-二氯二苯酮  分子式：C13H9Cl2NO    內(nèi)皮生長因子165   英文名稱：   vascuiar endothelial growth factor 165   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   VEGF165

2-Allylphenol  中文名：2-烯丙基酚  分子式：C9H10O    內(nèi)皮生長因子 D(VEGF-D)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝

2-Acetylfluorene  中文名：2-乙酰芴  分子式：C15H12O    內(nèi)皮生長因子 165(VEGF165)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝

2-Acetylbutyrolactone  中文名：2-乙酰基丁內(nèi)酯  分子式：C6H8O3    內(nèi)皮生長因子受體 1(VEGF-R1)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝
超氧化物歧化酶（SOD）分型測試盒（羥胺法）  Polyhydroxybutyrate  中文名：聚羥基丁酸酯  分子式：C12H20O7 

超氧化物歧化酶   30KU  Amoxicillin  中文名：阿莫西林  分子式：C16H19N3O5S  度：98.0%

超微量Na+K+–ATP酶測定試劑盒  Precursor of cefcapene diisopropylanmine salt  153012-37-4  中文名：  分子式：C28H42N6O8S2  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

超微量Na+K+–ATP酶測定試劑盒                    Pitavastatin calcium  147526-32-7  中文名：匹伐他汀鈣  分子式：C50H46CaF2N2O8 

超微量Ca-ATP酶測定試劑盒  Aurantio-obtusin  中文名：橙黃決明素  分子式：C17H14O7  度：99.0%
皺褶青霉PCR檢測試劑盒說明書大鼠肝星形細(xì)胞RHSteC來曲唑（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品Letrozole

NCI-H596[H596]細(xì)胞，人細(xì)胞 人細(xì)胞,SK-RC-42細(xì)胞 人肝星形細(xì)胞HHSteC醋酸亮丙瑞林質(zhì)量規(guī)格：>97%.BRLeuprorelin Acetate （Leuprolide Acetate）

小香豬皮膚細(xì)胞;SSC-S2氟米龍醋酸酯質(zhì)量規(guī)格：>97%Fluorometholone Acetate

NCR3 Others Human 人 NKp30 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 十溴二苯質(zhì)量規(guī)格：>98%Pentabromophenyl ether

CM-R068大鼠腎小管平滑肌細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL氨基雜環(huán)鹽酸鹽質(zhì)量規(guī)格：>98%3-Amino-3-azabicyclo[3.3.0]octane hydrochloride
KG-1細(xì)胞，細(xì)胞 人細(xì)胞,Hep3B2.1-7細(xì)胞 CL-0032BEL-7404(人細(xì)胞)5×106cells/瓶×2川楝素(標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品Toosendanin

敘利亞倉鼠腎細(xì)胞;BHK-21川芎嗪(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品Tetramethylpyrazine

F11R Others Human 人 JAM-A 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 川芎嗪質(zhì)量規(guī)格：≥98%,BRTetramethylpyrazine

外周血白細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)川續(xù)斷皂苷VI；木通皂苷D（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品Asperosaponin Ⅵ

CD300A Others Human 人 CD300A / CMRF-35H / IGSF12 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 赤芝酸E質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥97%Lucidenic acid E
反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。