PCR實驗方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實驗步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對表達量。

特點優(yōu)勢：
1. 特異性：豬副粘病毒PCR檢測試劑盒供應(yīng)使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實現(xiàn)對細菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測，當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時，可實現(xiàn)對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種及腸道致病菌，可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。
5.   優(yōu)勢1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證，確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

3-(3-Chloropropyl)-1,3-dihydro-7,8-dimethoxy-2H-3-benzazepin-2-one  85175-59-3  中文名：  分子式：C15H18ClNO3  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子4(TIMP-4)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

3-(1-Piperazinyl)-1,2-benzisothiazole  87691-87-0  中文名：  分子式：C11H13N3S  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子3(TIMP-3)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝         

2''-O-Acetylsprengerinin C  1220707-33-4  中文名：  分子式：C46H72O17  度：%  關(guān)鍵詞：  麥冬; 螺甾烷; 甾苷; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫  小鼠基質(zhì)細胞衍生因子-1(mouse SDF-1)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝

2-n-Propyl-4-methyl-6-(1-methylbenzimidazole-2-yl)benzimidazole  152628-02-9  中文名：  分子式：C19H20N4  度：98.0%      小鼠基質(zhì)細胞衍生因子-1a(mouse SDF-1a)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝

2-Naphthyl N-benzoylphenylalaninate  15873-25-3  中文名：2-萘基N-苯甲酰基苯丙氨酸酯  分子式：C26H21NO3  度：98.0%      小鼠基質(zhì)細胞衍生因子-1R(mouse SDF-1R)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝
口蹄疫病毒Asia-1亞型(FMDV-A1)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)   48T                 Phenformin   834-28-6  中文名：鹽酸苯乙雙胍  分子式：C10H16ClN5 

空腸彎曲菌(CJ)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)   48T  Trazodone   25332-39-2  中文名：鹽酸曲唑酮  分子式：C19H23Cl2N5O  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

可溶性內(nèi)皮細胞蛋白 C 受體 (sEPCR)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝     3β,5α-Dihydroxyergosta-7,22-dien-6-one  中文名：  分子式：C28H44O3 

可溶性內(nèi)皮生長因子受體1   英文名稱：   Human Soluble Fms-like Tyrosine Kinase 1/sVEGFR1   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   SFLT1  Paroxetine   78246-49-8  中文名：鹽酸帕羅西汀  分子式：C19H21ClFNO3 

可溶性內(nèi)皮生長因子受體1   英文名稱：   Human soluble Fms.liketyrosinekinase Receptor 1   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   sFLt-1  Paroxetine   78246-49-8  中文名：鹽酸帕羅西汀  分子式：C19H21ClFNO3  度：99.0%
豬副粘病毒PCR檢測試劑盒供應(yīng)TMEM27 Others Human 人 TMEM27 人細胞裂解液 (陽性對照) 酸性綠 50 質(zhì)量規(guī)格：BS,進口原裝Lissamine™ Green B

軟骨細胞培養(yǎng)基CM酸性綠A質(zhì)量規(guī)格：BS,>97%,進口分裝Acid Green A

C-33A細胞，人子細胞 兔主動脈平滑肌細胞,CCC-SMC-1細胞 人表皮角質(zhì)細胞-胎兒HEK-f焦1酸鉀(>97%,BC)質(zhì)量規(guī)格：>97%,BCPotassium pyrophosphate, tetrabasic

HFSF(人胚胎眼鞏膜成纖維細胞) 5×106cells/瓶×2鎢酸鉀二水(>98%,BR)質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRPotassium tungstate, dehydrate

hMoCD14+-PB single donorpre-screened Pellet 人類外周血CD14+單核細胞團塊單一來源，預(yù)選型 > 1 mio.cells 人脊髓星形膠質(zhì)細胞RNAHA-sp miRNA5 μg硫酸奎寧水合物(>98%,BR)質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRQuinine hemisulfate salt hydrate
雜交瘤(B類);Z51B3C10H12A12G2F7B5TES；Tris乙磺酸,2-[（三（羥甲基）甲基）氨基]-1-乙磺酸質(zhì)量規(guī)格：>99%,ARTES

中國倉鼠卵巢細胞系;CHO-TGF-beta-3/2000 Carrying Psv2-beta-TGF 肥大細胞瘤細胞，P815細胞 INS-1細胞，大鼠胰島素細胞3-[ (N-三(羥甲基)甲氨基]-2-羥基丙磺酸鈉質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRTAPSO mono

293來源病毒包裝細胞;ΦA-GPTAPSO；3-[ (N-三(羥甲基)甲氨基]-2-羥基丙磺酸質(zhì)量規(guī)格：>99%,BRTAPSO

STIM1 Others Human 人 STIM1 / GOK 人細胞裂解液 (陽性對照) N-三(羥甲基)甲基-3-氨基丙磺酸鈉質(zhì)量規(guī)格：>99%,BRTAPS  Salt

神經(jīng)元細胞Many types of cells包裝：5 ×105方(1ml)S-I-G-S-L-A-K質(zhì)量規(guī)格：>95%,BRS-I-G-S-L-A-K
反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個堿基，應(yīng)嚴格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。