技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對(duì)表達(dá)量。

PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

特點(diǎn)優(yōu)勢(shì)：
1. 特異性：豬輪狀病毒群PCR檢測(cè)試劑盒直銷使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對(duì)，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測(cè)，特異性均達(dá)到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)菌的高靈敏檢測(cè)，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí)，可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測(cè)，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實(shí)用性：檢測(cè)范圍廣，涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌，可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測(cè)，整個(gè)檢測(cè)過程為3-4個(gè)小時(shí)。
5.   優(yōu)勢(shì)1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢(shì)2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測(cè)試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證，確保在使用過程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報(bào)告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長(zhǎng)度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
3,3',4,4'-Benzophenone tetracarboxylic dianhydride  2421-28-5  中文名：3,3',4,4'-二苯甲酮四甲酸二酐  分子式：C17H6O7    神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)素3   英文名稱：   Neuroophin-3   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   -3

1,2-Benzisothiazolin-3-one  2634-33-5  中文名：1,2-苯并異噻唑-3-酮  分子式：C7H5NOS    上腺髓質(zhì)素(ADM)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Benzoin methyl ether  3524-62-7  中文名：安息香甲基醚  分子式：C15H14O2    神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Benzanthrone  1982/5/3  中文名：苯并蒽酮  分子式：C17H10O    熱休克蛋白糖蛋白96(HSPgp96)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

L-(+)-Arginine  74-79-3  中文名：L-(+)-精氨酸  分子式：C6H14N4O2    腦素/腦尿肽(BNP)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝
錳快速測(cè)試盒   Manganese rapid test case  Ranitidine  中文名：雷尼替丁  分子式：C13H22N4O3S 

錳過氧化物酶（MnP）測(cè)試盒   可見分光光度法   50管/24樣  Prasugrel  中文名：普拉格雷  分子式：C20H20FNO3S 

錳測(cè)試盒   Manganese test case  4-[2-[(3-Ethyl-4-methyl-2-oxo-3-pyrrolin-1-yl)carboxamido]ethyl]benzenesulfonamide  119018-29-0  中文名：  分子式：C16H21N3O4S 

霉素檢測(cè)試紙條（液態(tài)樣品）   Chloramphenicol detection test sip (liquid sample)                 Pidotimod  121808-62-6  中文名：匹多莫德  分子式：C9H12N2O4S 

霉(AFT)ELISAKit   ELISA.   96T/48T              Triptoquinone A  142950-86-5  中文名：  分子式：C20H24O4
豬輪狀病毒群PCR檢測(cè)試劑盒直銷TGFBR1 Others Human 人 TGFBR1 / ALK-5 / SKR4 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 瑞香素/祖師麻甲素(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品Daphnetin

雜交瘤(B類);Z172A4C4C6F3G12三氯蔗糖(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品Sucralose

心房成纖維細(xì)胞 (HCFaa)( 5×105 )三七皂甙R1（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品Notoginsenoside R1

CM-M121小鼠角膜內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL三葉豆紫檀苷(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品Trifolirhizin

野生型人c-kit受體細(xì)胞株;A7d 小鼠肺動(dòng)脈成纖維細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL日當(dāng)藥黃素(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品Swertiajaponin
CCL17 Others Mouse 小鼠 CCL17 / TARC 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) L-高本酸shēng huà shì jì容量：RT5克

小鼠前低轉(zhuǎn)移細(xì)胞(綠色熒光蛋白標(biāo)記);MFC-B5-GFP阿苷 Uracil 1-β-D-arabinofuranoside 3083-77-0 100MG 通用試劑

SK-BR-3細(xì)胞，腺癌細(xì)胞 人細(xì)胞,TE-1細(xì)胞 中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞K1(亞系克隆);CHO-K1六拂炳1;全拂炳1 Hqxcfluoropropqnq;Hqxcfluoropropylqnq;Pqrfluoropropqnq 116-12-4

小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞;PUMC-mips-B4Semicarbazidexy7nochloride鹽酸脲100克實(shí)習(xí)級(jí)，98%

CPE Others Human 人 CPE 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 104-88-14-錄;對(duì)錄4-Chloro