技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對(duì)表達(dá)量。

PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

特點(diǎn)優(yōu)勢(shì)：
1. 特異性：瑞氏通用PCR檢測(cè)試劑盒供應(yīng)使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對(duì)，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測(cè)，特異性均達(dá)到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)菌的高靈敏檢測(cè)，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí)，可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測(cè)，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實(shí)用性：檢測(cè)范圍廣，涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌，可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測(cè)，整個(gè)檢測(cè)過程為3-4個(gè)小時(shí)。
5.   優(yōu)勢(shì)1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢(shì)2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測(cè)試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證，確保在使用過程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報(bào)告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
3β,5α,9α-Trihydroxyergosta-7,22-dien-6-one  88191-14-4  中文名：  分子式：C28H44O4    兔子壞死因子α(TNF-α) ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

3β-Hydroxyporiferast-5-en-7-one  145163-97-9  中文名：  分子式：C29H48O2    Rat vascular endothelial cell adhesion molecule 1 (VCAM-1/CD106) ELISA Kit 大鼠內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)ELISA試劑盒

Stigmast-4-ene-3β,6β-diol  113626-76-9  中文名：豆甾-4-烯-3β,6β-二醇  分子式：C29H50O2    Humanisletcellaibody,ICAELISAKit 人胰島細(xì)胞抗體(ICA)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Stellasterol  2465/11/4  中文名：星魚甾醇  分子式：C28H46O    Humancytokeratin19,CK-19ELISA試劑盒人細(xì)胞角蛋白19(CK-19)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

7α-Hydroxystigmasterol  64998-19-2  中文名：7α-羥基豆甾醇  分子式：C29H48O2    組織HPV7(HUMANPAPILLOMAVIRUS-7)病毒定性檢測(cè)試劑盒20次
人脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  2-Benzylsuccinic acid  3972-36-9  中文名：  分子式：C11H12O4  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

人脂多糖elisa試劑盒   人脂多糖試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   人脂多糖試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人脂多糖試劑盒、人脂多糖elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  2-Benzylacrylic acid  5669-19-2  中文名：  分子式：C10H10O2  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

人脂多糖/內(nèi)(LPS)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  2-Benzylsuccinic acid  中文名：  分子式：C11H12O4  度：98.0%

人脂蛋脂酶A2elisa試劑盒   人脂蛋脂酶A2試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   人脂蛋脂酶A2試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人脂蛋脂酶A2試劑盒、人脂蛋脂酶A2 elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。     2-Benzyl-2-(dimethylamino)-4'-morpholinobutyrophenone  中文名：2-芐基-2-(二甲基氨基)-4'-嗎啉基苯基丁酮  分子式：C23H30N2O2 

人脂蛋脂酶A2(Lp-PL-A2)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  2-Benzoylbenzoic acid  85-52-9  中文名：2-苯甲酰苯甲酸  分子式：C14H10O3  度：98.0%
瑞氏通用PCR檢測(cè)試劑盒供應(yīng)RSPO2 Protein Human 重組人 FTLS / RSPO2 蛋白 (186 Leu/Pro, Fc 標(biāo)簽)鹽酸決奈達(dá)隆質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口Dronedarone HCl

人氣管平滑肌細(xì)胞 (HTSMC)( 5×105 ) MLF, 小鼠成纖維細(xì)胞 Mouse鹽酸決奈達(dá)隆-d6質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口Dronedarone-d6 HCl

中國倉鼠卵巢細(xì)胞(亞系克隆);CHO-5beta 41,2.5 CL5 Carrying P5b/dhfr去丁基鹽酸決奈達(dá)隆-d6質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口Desbutyl Dronedarone-d6 HCl

GPHA2 Others Human 人 GPHA2 / Glycoprotein hormone alpha 2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) O-脫芳香基雷諾嗪質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口O-Desaryl Ranolazine

CL-0069COS-7(非洲綠猴SV40轉(zhuǎn)化的腎細(xì)胞)5×106cells/瓶×2四環(huán)素(國產(chǎn))質(zhì)量規(guī)格：BR,國產(chǎn)Tetracycline
人腦干星形膠質(zhì)細(xì)胞HA-bs2′-脫氧胞苷-5′-二嶙酸三鈉鹽5克RT

STK4 Others Human 人 STK4 / MST1 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 三化硼 Boron trifluoride methanol complex sol... 2802-68-8 100ML 通用試劑

猞猁皮膚成纖維樣細(xì)胞;ELS1L-半胱安醋;L-半膀胱安基醋;L-β-流輕代炳安醋;L-2-安基-3-炳醋 L-Cystqinq;L-2-cMino-3-Mqrccptopropcnoic ccid;L-α-cMino-β-thiopropionic ccid;(R)-2-cMino-3-Mqrccptopropionic ccid;CyS 2-90-4

BALB/3T3細(xì)胞，BALB/C小鼠胚成纖維細(xì)胞 人細(xì)胞,PC-2細(xì)胞 CM-M024小鼠成纖維細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL焦嶙酸鈉5克2～8℃

大鼠細(xì)胞;UMR-10650-28-2β-雌二醇;雌甾二醇;17β-雌二醇;3,17β-二羥基-1,3,5(10)雌甾三1;1,3,5(10)-雌甾三1-3,17β-二醇;雌甾-1,3,5(10)-三1-3,17β-二醇β-Estradiol;17β-Estradiol;3, 17β-Dixy7noxy-1, 3, 5(10)-estratriene;1, 3, 5(10)-Estratriene-3, 17β-diol;cis-Estradiol;3, 17-Epidixy7noxyestratriene;17β-Estra-1, 3, 5(10)-triene-3, 17β-diol;