PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對表達(dá)量。

特點(diǎn)優(yōu)勢：
1. 特異性：輪狀病毒群PCR檢測試劑盒供應(yīng)使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實(shí)現(xiàn)對細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達(dá)到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí)，可實(shí)現(xiàn)對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實(shí)用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌，可實(shí)現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個(gè)檢測過程為3-4個(gè)小時(shí)。
5.   優(yōu)勢1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證，確保在使用過程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報(bào)告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

4-Aminobutyric acid  1956/12/2  中文名：4-氨基丁酸  分子式：C4H9NO2    細(xì)菌茁糖酵解酚紅瓊脂平板50個(gè)

Gliquidone  33342-05-1  中文名：格列喹酮  分子式：C27H33N3O6S    rabbitEndostatin,ESELISAKit兔子內(nèi)皮抑素(ES)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

Lansoprazole  103577-45-3  中文名：蘭索拉唑  分子式：C16H14F3N3O2S    豚鼠C反應(yīng)蛋白(CRP)ELISA試劑盒 ，英文名： CRP ELISA Kit

Gliclazide  21187-98-4  中文名：格列齊特  分子式：C15H21N3O3S    Human hepatocyte growth factor (HGF) ELISA Kit 人肝細(xì)胞生長因子(HGF)ELISA試劑盒

Carvedilol  72956-09-3  中文名：卡維地洛  分子式：C24H26N2O4    rabbitFibrinogenDegradationProduct,FDPELISAKit 兔子血纖蛋白原降解產(chǎn)物(FDP)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
乳酸脫氫酶（LDH）測試盒   Lactate dehydrogenase (LDH) test kit  3-Acetylcoumarin  中文名：3-乙?；愣顾?/span>  分子式：C11H8O3  度：99.0%

乳酸（LD）測試盒（測血清、組織等）   Lactic acid (LD) test case (serum, tissue, etc.)  3a-Hydroxy-3,3a,7,7a-tetrahydrobenzofuran-2,6-dione  55604-88-1  中文名：  分子式：C8H8O4 

乳酸（LD）測試盒（測全血）   Lactic acid (LD) test case (whole blood)  3a-Hydroxy-3,3a,7,7a-tetrahydrobenzofuran-2,6-dione  55604-88-1  中文名：  分子式：C8H8O4  度：%  關(guān)鍵詞：  植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫

乳酸（LD）（血清、組織）檢測   Lactic acid (LD) (whole blood) detection  3-Acetylcoumarin  3949-36-8  中文名：3-乙?；愣顾?/span>  分子式：C11H8O3  度：99.0%  關(guān)鍵詞： 

乳酸（LD）（全血）檢測   Lactate dehydrogenase (LDH) detection  3-Acetylcoumarin  3949-36-8  中文名：3-乙酰基香豆素  分子式：C11H8O3
輪狀病毒群PCR檢測試劑盒供應(yīng)PTPN11 Others Mouse 小鼠 SHP2 / PTPN11 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) MK-2866質(zhì)量規(guī)格：>99%Ostarine,GTx-024

人成纖維細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mLXTT鈉鹽質(zhì)量規(guī)格：>90%,進(jìn)分XTT  salt

PA317細(xì)胞，逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝用的人胚胎成纖維細(xì)胞 小腸耶爾森氏菌 豚鼠肺細(xì)胞;GP-F1二氫獼猴桃內(nèi)酯,奇異果內(nèi)酯(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品(2,6,6-Trimethyl-2-hydroxycyclohexylidene)acetic acid lactone

CCL17 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CCL17 / TARC 蛋白 (His 標(biāo)簽)二氫獼猴桃內(nèi)酯,奇異果內(nèi)酯質(zhì)量規(guī)格：>99%,AR(2,6,6-Trimethyl-2-hydroxycyclohexylidene)acetic acid lactone

NG108-15(小鼠神經(jīng)細(xì)胞瘤與大鼠神經(jīng)之融合細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 人 FAM20B / Gxk1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 乳清酸質(zhì)量規(guī)格：>98%(T),BROrotic acid
THC-8307細(xì)胞，人高分化腺癌細(xì)胞系 人低侵襲性脈絡(luò)膜色素素瘤細(xì)胞,OCM-1A細(xì)胞 綠色熒光蛋白標(biāo)記人細(xì)胞;MGC803-GFPACRYL/BIS29:1酰胺/甲叉 29:1, 40%溶液超級透明，無色溶液COLDsigma

HIC(人小細(xì)胞) 5×106cells/瓶×25--2-脫氧尿苷 5-Iodo-2′-deoxyuridine,≥99% 54-42-2 1G 通用試劑

ACE2 Others Human 人 ACE2 / ACEH 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 4-基-1,2-環(huán)己二羧臘酐 Hqxcxy7no-4-mqthylphthclic cnhydridq 19438-60-9

人口腔角質(zhì)細(xì)胞HOKTRISTRIS超級白色結(jié)晶粉末至針狀晶體RTsigma

HA Others H1N1 甲型 H1N1 (A/England/195/2009) HA 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 對錄本4-CHLOROMERCURIBENZOIC ACID
反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。