PCR實驗方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實驗步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對表達量。

特點優(yōu)勢：
1. 特異性：傷寒沙門氏菌PCR檢測試劑盒直銷使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實現(xiàn)對細菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測，當(dāng)樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時，可實現(xiàn)對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種及腸道致病菌，可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。
5.   優(yōu)勢1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證，確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

5-Aminofluorescein  3326-34-9  中文名：5-氨基熒光素  分子式：C20H13NO5  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠核因子κB亞基p65親和肽(NF-κBp65)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

5-Amino-2-naphthalenesulfonic acid  119-79-9  中文名：5-氨基-2-萘磺酸  分子式：C10H9NO3S  度：98.0%      小鼠血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa(GP-ⅡbⅢa/CD41+CD61)ELISAKit   ELISA.   96T/48T           

5-Amino-2-methylindole  7570-49-2  中文名：5-氨基-2-甲基吲哚  分子式：C9H10N2  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠抗內(nèi)膜抗體(EMAb)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

5-Amino-1-naphthol  83-55-6  中文名：5-氨基-1-萘酚  分子式：C10H9NO  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠復(fù)合物(LDL-IC)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

5-Amino-1-(2-hydroxyethyl)pyrazole  73616-27-0  中文名：  分子式：C5H9N3O  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠解脲脲原體抗體(UU-Ab)ELISAKit   ELISA.   96T/48T
同型半胱酸（Hcy）測定試劑盒（酶循環(huán)法）  4-Allyloxy-2-hydroxybenzophenone  2549-87-3  中文名：4-丙烯氧基-2-羥基二苯甲酮  分子式：C16H14O3  度：99.0%  關(guān)鍵詞： 

鐵蛋白   英文名稱：   human Ferritin   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   Fe  4-Acetamidophenol  103-90-2  中文名：對乙酰氨基酚  分子式：C8H9NO2  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

鐵測試盒   Iron test case  4-[2-[(3-Ethyl-4-methyl-2-oxo-3-pyrrolin-1-yl)carboxamido]ethyl]benzenesulfonamide  119018-29-0  中文名：  分子式：C16H21N3O4S  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

調(diào)節(jié)活化蛋白   英文名稱：   Human Raes   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   RAES  4-[2-(2-Amino-4,7-dihydro-4-oxo-1H-pymol[2,3-d]pyrimodin-5-yl)ethyl]benzoic acid methyl ester  155405-80-4  中文名：  分子式：C16H16N4O3  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

甜菜堿含量測定試劑盒   可見分光光度法   50管/48樣  4-[(4-Methylpiperazin-1-yl) methyl]benzoic acid di  106261-49-8  中文名：甲磺酸伊馬替尼  分子式：C13H20Cl2N2O2  度：98.0%  關(guān)鍵詞：
傷寒沙門氏菌PCR檢測試劑盒直銷PA-1細胞，人卵巢 Ad5DNA轉(zhuǎn)化的胚腎,HEK-293細胞 心肌細胞Many types of cells包裝：5 ×105方(1ml)TRIS,1M,pH8.0Tris溶液生物技術(shù)級透明無色液體RTsigma

山羊皮膚細胞;WGS1λ型角叉菜膠 λ-Carrageenan 9000-7-1 1G 通用試劑

S100B Others Human 人 S100B 人細胞裂解液 (陽性對照) 溴化金 GOLD(III) BROMIDq 1094-8-7

CL-00074T1(小鼠癌細胞)5×106cells/瓶×2etxylcaprate羊蠟酸乙酯100TCP，26.2%

EFNA5 Others Rat 大鼠 Ephrin-A5 / EFNA5 人細胞裂解液 (陽性對照) 110-17-8富馬酸;反二酸;;紫堇酸;1，2-二羧酸FuMaric Acid;Boletic acid;Lichenic acid;trans-1,2-etxylenedicarboxylic acid
THBD Others Rat 大鼠 Thrombomodulin / THBD 人細胞裂解液 (陽性對照) 曲扶胸甙，英文名或英文縮寫：Trifluorothymidine，級別：高，98%，規(guī)格：1克

腦微內(nèi)皮細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)3-[(3-膽酰安炳基)二基安]-1-炳磺醋水合物 98% 3-((3-CHOLcMIDOPROPYL)DIMqTHYLcMMONIO)-& 3133-04-0

Raji細胞，人Butt`s瘤細胞 C57小鼠色素瘤瘤株,ME細胞 人腎近曲小管上皮細胞裂解物HRPTEpiCLBSALOWENODOTOXIN白蛋白,低內(nèi)生物技術(shù)級白色至淡黃色粉末COLDsigma

NCI-H23(人非小細胞細胞) 5×106cells/瓶×2硼酸shēng huà shì jì容量：RT10克

CCD-1095Sk(人浸潤性導(dǎo)管癌旁皮膚細胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0078EL4(小鼠瘤細胞)5×106cells/瓶×2 615小鼠網(wǎng)織細胞性瘤株;L615Pronase 250mg/1g Roche分裝
反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個堿基，應(yīng)嚴格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。