技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對(duì)表達(dá)量。

PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

特點(diǎn)優(yōu)勢(shì)：
1. 特異性：甲型副傷寒沙門氏菌PCR檢測(cè)試劑盒說明書使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫(kù)的比對(duì)，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測(cè)，特異性均達(dá)到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)菌的高靈敏檢測(cè)，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí)，可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測(cè)，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實(shí)用性：檢測(cè)范圍廣，涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌，可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測(cè)，整個(gè)檢測(cè)過程為3-4個(gè)小時(shí)。
5.   優(yōu)勢(shì)1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢(shì)2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測(cè)試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證，確保在使用過程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報(bào)告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長(zhǎng)度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
5-(4-(2-(5-Ethylpyridin-2-yl)ethoxy)benzylidene)thiazolidine-2,4-dione  144809-28-9  中文名：  分子式：C19H18N2O3S  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠抗抗體(AOAb)ELISA試劑盒   48T/96T   試劑盒   組裝/原裝

5-(4-((3-chloro-4-((3-fluorobenzyl)oxy)phenyl)amino)quinazolin-6-yl)furan-2-carbaldehyde  231278-84-5  中文名：  分子式：C26H17ClFN3O3  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠抗激素/加壓素/精酸加壓素(ADH/VP/AVP)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

5-(2-Aminopropyl)-7-cyanoindolin-1-yl)propyl benzoate  239463-72-0  中文名：  分子式：C22H25N3O2  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠抗鹽抵抗的酸性0酸酶(AP)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

5-(1-Piperazinyl)benzofuran-2-carboxamide  183288-46-2  中文名：  分子式：C13H15N3O2  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠抗酸性0酸酶5b(ACP-5b)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝        

4β-Hydroxywithanolide E  54334-04-2  中文名：4β-羥基醉茄內(nèi)酯E  分子式：C28H38O8  度：98.0%  關(guān)鍵詞：  蛻皮甾體拮抗劑; ; 酸漿屬; 中藥對(duì)照品; 中藥標(biāo)準(zhǔn)品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫(kù)  小鼠抗甲狀腺球蛋白抗體(ATGA/TGAB)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝
四甲基化銨   100g  4,4'-Bis(2-benzoxazolyl)stilbene  1533-45-5  中文名：4,4'-雙(2-苯并惡唑基)芪  分子式：C28H18N2O2  度：98.0%   

水質(zhì)檢測(cè)儀、比色計(jì)專用試劑   Water quality detector, colorimeic reage  4-(Phenylthio)benzyl alcohol  6317-56-2  中文名：  分子式：C13H12OS  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

水質(zhì)讀卡儀器   Water quality reading card insume  4-(N-Methyl)-aminoantipyrine  519-98-2  中文名：  分子式：C12H15N3O  度：95.0%  關(guān)鍵詞： 

水硬度快速測(cè)試盒   Water hardness rapid test case  α-Spinasterol glucoside  1745-36-4  中文名：α-菠甾醇葡萄糖苷  分子式：C35H58O6  度：97.0%  關(guān)鍵詞：  ; 豆甾烷; 甾苷; 中藥對(duì)照品; 中藥標(biāo)準(zhǔn)品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫(kù)

水樣中六價(jià)鉻離子（Cr6+）濃度測(cè)試盒   可見分光光度法   50管/48樣  4-(4-Fluorophenyl)-6-isopropyl-2-[(N-methyl-N-methylsulfonyl)amino]pyrimidinyl-5-yl-formyl  147118-37-4  中文名：  分子式：C16H18FN3O3S
甲型副傷寒沙門氏菌PCR檢測(cè)試劑盒說明書PDCD1LG2 Others Human 人 PD-L2 / B7-DC / CD273 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 蕓苔素內(nèi)酯(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品Brassinolide

CM-M039小鼠胃粘膜上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL啶蟲脒(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品Acetamiprid

TACSTD2 Others Mouse 小鼠 OP2 / TACSTD2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 赫斯特?zé)晒馊剂?/span>33258質(zhì)量規(guī)格：>98%,進(jìn)分bisBenzimide H 33258

小鼠腎小球內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL赫斯特?zé)晒馊剂?/span>33342質(zhì)量規(guī)格：>98%,進(jìn)分bisBenzimide H 33342 trihydrochloride

A498人細(xì)胞 Human renal cell carcinoma A498 cells DMEM+10%FBSFluo-3 AM;鈣熒光探針質(zhì)量規(guī)格：>90%,進(jìn)口Fluo 3-AM
腎系膜細(xì)胞培養(yǎng)基MCM-prf4-(三氟甲基)煙酰胺質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口4-(Trifluoromethyl)nicotinamide

CDC42BPB Others Human 人 CDC42BPB 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 1-甲基-煙酰胺化物質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口1-Methyl-nicotinamide Iodide

人正常基質(zhì)永生化細(xì)胞;WPMY-1煙酰胺-2,4,5,6-d4質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口Nicotinamide-2,4,5,6-d4

P388D1細(xì)胞，瘤細(xì)胞 人腺癌細(xì)胞,HCT-8細(xì)胞 CM-H020人胰島β細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mLN-(羥甲基)煙酰胺質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口N-(Hydroxymethyl)nicotinamide

大鼠骨骼肌成肌細(xì)胞;L6β-萘酚,異萘酚質(zhì)量規(guī)格：AR2-Naphthol