PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過(guò)與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對(duì)表達(dá)量。

特點(diǎn)優(yōu)勢(shì)：
1. 特異性：神經(jīng)肉孢子蟲(chóng)PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)使用的引物均經(jīng)過(guò)詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過(guò)GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫(kù)的比對(duì)，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測(cè)，特異性均達(dá)到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過(guò)大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)菌的高靈敏檢測(cè)，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí)，可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測(cè)，無(wú)需繁瑣的增菌過(guò)程。
4.   實(shí)用性：檢測(cè)范圍廣，涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌，可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測(cè)，整個(gè)檢測(cè)過(guò)程為3-4個(gè)小時(shí)。
5.   優(yōu)勢(shì)1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢(shì)2：該系列試劑盒均經(jīng)過(guò)大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測(cè)試劑盒均經(jīng)過(guò)了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證，確保在使用過(guò)程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽(yáng)性及假陰性報(bào)告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

5-Androsten-3β-ol-17-one ethyleneketal  7745-40-6  中文名：  分子式：C21H32O3  度：98.0%      小鼠抗平滑肌抗體(ASMA)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

5-Aminouracil  932-52-5  中文名：5-氨基尿嘧啶  分子式：C4H5N3O2  度：98.0%      小鼠抗凝血酶受體(A)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

5-Aminosalicylic acid  89-57-6  中文名：5-氨基水楊酸  分子式：C7H7NO3  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠抗凝血酶Ⅲ抗體(AT-Ⅲ)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝        

5-Aminoindole  5192-03-0  中文名：5-氨基吲哚  分子式：C8H8N2  度：98.0%      小鼠抗平滑肌抗體(ASMA)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

5-Aminoindazole  19335-11-6  中文名：5-氨基吲唑  分子式：C7H7N3  度：98.0%      小鼠胚胎干細(xì)胞系MESPU30(M30)ELISAKit   ELISA.   96T/48T
土壤中性0酸酶（S-NP）試劑盒   可見(jiàn)分光光度法   50管/48樣  4-Amino-3-hydroxybenzoic acid  中文名：4-氨基-3-羥基苯甲酸  分子式：C7H7NO3  度：98.0%

土壤中性0酸酶(S-NP)測(cè)試盒   可見(jiàn)分光光度法   50管/48樣  4-Aminobenzophenone  1137-41-3  中文名：4-氨基二苯甲酮  分子式：C13H11NO  度：99.0%  關(guān)鍵詞： 

土壤蔗糖酶(S-SC)測(cè)試盒   可見(jiàn)分光光度法   50管/24樣              4-Amino-3-hydroxy-1-naphthalenesulfonic acid  中文名：4-氨基-3-羥基-1-萘磺酸  分子式：C10H9NO4S 

土壤硝態(tài)氮測(cè)試盒   可見(jiàn)分光光度法   50管/48樣  Triamcinolone acetonide  76-25-5  中文名：曲安奈德  分子式：C24H31FO6  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

土壤纖維素酶（S-CL）試劑盒   可見(jiàn)分光光度法    50管/24樣  4-Aminoantipyrine  1983/7/8  中文名：4-氨基安替比林  分子式：C11H13N3O  度：99.0%  關(guān)鍵詞：
神經(jīng)肉孢子蟲(chóng)PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)P3/NSI/1-Ag4-1 [NS-1] (小鼠細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 MC3T3-E1 Subclone 14(小鼠原成骨細(xì)胞)薯蕷皂甙質(zhì)量規(guī)格：BR，含量≥95.0%Dioscin

CL-0288MA-891(小鼠癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞)5×106cells/瓶×2薯蕷皂素(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98.0%,標(biāo)準(zhǔn)品Diosgenin

CLEC4F Others Rat 大鼠 CLEC4F / CLECSF13 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 薯蕷皂素質(zhì)量規(guī)格：>95%,BRDiosgenin

人前脂肪細(xì)胞-內(nèi)臟cDNAHPA-v cDNAD-半胱氨酸鹽酸鹽一水質(zhì)量規(guī)格：度大于98%,BR，一水物D-Cysteine hydrochloride monohydrate

BCaP-37細(xì)胞，人癌細(xì)胞 猴腎細(xì)胞系,MA-104細(xì)胞 腸內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)鈣蛋白酶抑制劑II(進(jìn)口)質(zhì)量規(guī)格：≥95%,美國(guó)進(jìn)口Calpain Inhibitor II(ALLM)
人微內(nèi)皮細(xì)胞HMMEC1,10-雙[(4-乙氧羰基)苯氧基]癸烷質(zhì)量規(guī)格：1,10-Bis[4-(ethoxycarbonyl)phenoxy]decane

CD1D & B2M Others Human 人 CD1D & B2M Heterodimer 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 1,4-苯二硫醇(>98.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)1,4-Benzenedithiol

非洲綠猴腎細(xì)胞系/HCV-NS3;Vero-HCV-NS31,3-雙[2-(4-羥苯基)-2-丙基]苯(>98.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)1,3-Bis[2-(4-hydroxyphenyl)-2-propyl]benzene

大鼠癌細(xì)胞;SHZ-88 細(xì)胞，BEL-7405細(xì)胞 MEF細(xì)胞，早代小鼠胚胎成纖維細(xì)胞雙(氨甲基)降莰烷(含有)(>98.0%(T))質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(T)Bis(aminomethyl)norbornane (mixture of isomers)

MG-63, 人細(xì)胞 Human1,4-雙(3-羥基苯氧基)苯(>96.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格：>96.0%(GC)1,4-Bis(3-hydroxyphenoxy)benzene
反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長(zhǎng)度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。