技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過(guò)與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對(duì)表達(dá)量。

PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

特點(diǎn)優(yōu)勢(shì)：
1. 特異性：牛血吸蟲(chóng)PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書使用的引物均經(jīng)過(guò)詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過(guò)GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫(kù)的比對(duì)，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測(cè)，特異性均達(dá)到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過(guò)大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)菌的高靈敏檢測(cè)，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí)，可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測(cè)，無(wú)需繁瑣的增菌過(guò)程。
4.   實(shí)用性：檢測(cè)范圍廣，涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌，可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測(cè)，整個(gè)檢測(cè)過(guò)程為3-4個(gè)小時(shí)。
5.   優(yōu)勢(shì)1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢(shì)2：該系列試劑盒均經(jīng)過(guò)大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測(cè)試劑盒均經(jīng)過(guò)了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證，確保在使用過(guò)程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽(yáng)性及假陰性報(bào)告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長(zhǎng)度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
5-Benzyl N-(tert-butoxycarbonyl)-L-glutamate  中文名：N-(叔丁氧羰基)-L-谷氨酸-5-芐酯  分子式：C17H23NO6    樣生長(zhǎng)因子 -2(IGF-2)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝

5-Benzyl L-glutamate  中文名：L-谷氨酸5-芐酯  分子式：C12H15NO4    樣生長(zhǎng)因子 -1 受體 (IGF-1R)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝

5-Benzyl D-glutamate  中文名：D-谷氨酸5-苯甲酯  分子式：C12H15NO4    樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白 -1(IGFBP-1)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝

5-Benzoylpentanoic acid  中文名：5-苯甲酰基戊酸  分子式：C12H14O3    樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白 -2(IGFBP-2)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  

5-Benzimidazolecarboxylic acid  中文名：5-苯并咪唑甲酸  分子式：C8H6N2O2    胰蛋白酶檢測(cè)   Alkaline phosphatase (AKP) detection
兔II型前膠原C端肽(rabbit PIICP)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  4-Androstenediol  1156-92-9  中文名：4-雄烯二醇  分子式：C19H30O2  度：95.0%  關(guān)鍵詞： 

兔II型膠原C端肽(rabbit CTX-II)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  4-Androstenediol  中文名：4-雄烯二醇  分子式：C19H30O2  度：95.0%

兔II型膠原(rabbit Collagen II)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  4-Aza-*ndrostan-1-ene- 3-one-17carboxylic acid  140700-63-6  中文名：  分子式：C19H27NO3 

兔elisa試劑盒   兔試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔試劑盒、兔elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  5-Hydroxymethylfurfural  67-47-0  中文名：5-羥甲基糠醛  分子式：C6H6O3  度：%  關(guān)鍵詞：  抗菌; 山茱萸; 黃精; 中藥對(duì)照品; 中藥標(biāo)準(zhǔn)品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫(kù)

兔D2聚體(rabbit 2-Dimer)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝     4-Androstenediol  中文名：4-雄烯二醇  分子式：C19H30O2
牛血吸蟲(chóng)PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書OLR1 Others Rat 大鼠 OLR1 / LOX1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 螺內(nèi)酯質(zhì)量規(guī)格：>99%,USP 32,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)Spironolactone

神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)基NM-prf螺內(nèi)酯（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品Spironolactone

SiHa細(xì)胞，人細(xì)胞 小鼠血細(xì)胞,WEHI-3細(xì)胞 子宮成纖維細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)硫唑嘌呤質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)Azathioprine

Hela 299(人細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2鹽酸巴尼地平質(zhì)量規(guī)格：>99%,BRBarnidipine HCl

hMNC-CB pooled Pellet 人類臍帶血單核細(xì)胞混合團(tuán)塊，超 > 1 mio.cells 人角膜上皮細(xì)胞總RNAHCEpiC NA鹽酸頭孢吡1 質(zhì)量規(guī)格：含量82.5%~91.1%（每毫克頭孢吡1含量，干品）Cefepime Hydrochloride
NRK-52E 大鼠腎細(xì)胞阿昔洛韋單1酸鹽質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口Acyclovir Monophosphate

大額牛皮膚成纖維樣細(xì)胞;BOS-2阿昔洛韋-d4質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口Acyclovir-d4

Caki-1, 人腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞N2-乙酰基-9-（2-乙酰氧基乙氧基甲基）鳥(niǎo)嘌呤（阿昔洛韋雜質(zhì)）質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口N2-Acetyl-9-(2-acetoxyethoxymethyl)guanine (Acyclovir Impurity)

人細(xì)胞;SF763 大鼠頜下腺上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL腺苷3′,5′-環(huán)單硫代1酸酯，8-氯-,Rp-異構(gòu)體鈉鹽質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口Adenosine 3′,5′-cyclic Monophosphorothioate, 8-Chloro-, Rp-Isomer,  Salt

組織源性原代細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)/1ml阿西美辛(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品Acemetacin