PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對(duì)表達(dá)量。

特點(diǎn)優(yōu)勢(shì)：
1. 特異性：帶PCR檢測(cè)試劑盒說明書使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對(duì)，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測(cè)，特異性均達(dá)到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)菌的高靈敏檢測(cè)，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí)，可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測(cè)，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實(shí)用性：檢測(cè)范圍廣，涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌，可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測(cè)，整個(gè)檢測(cè)過程為3-4個(gè)小時(shí)。
5.   優(yōu)勢(shì)1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢(shì)2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測(cè)試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證，確保在使用過程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報(bào)告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

Aminophenazone  中文名：  分子式：C13H17N3O  度：98.0%  小鼠促上腺皮質(zhì)激素(ACTH)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝        

Naproxen  中文名：萘普生  分子式：C14H14O3  度：98.0%  小鼠激素釋放激素   英文名稱：   Mouse Gonadoopin-Releasing Hormone   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   GH

Chlorpheniramine maleate  中文名：馬來酸氯苯那敏  分子式：C20H23ClN2O4  度：98.0%  小鼠葡萄糖氧化酶   英文名稱：   Mouse Glucose Oxidase   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   GOD

2-Aminoisonicotinic acid  中文名：2-氨基異煙酸  分子式：C6H6N2O2  度：98.0%  小鼠胰素   英文名稱：   Mouse Glucagon   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   GC

5-Aminoindole  中文名：5-氨基吲哚  分子式：C8H8N2  度：98.0%  小鼠葡萄糖60酸脫氫酶   英文名稱：   Mouse Glucose 6 Phosphate Dehydrogenase   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   G6PD
兔子腦素elisa試劑盒   兔子腦素試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔子腦素試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔子腦素試劑盒、兔子腦素elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。     7-Amino-3-methyl-3-cephem-4-carboxylic acid  中文名：  分子式：C8H10N2O3S 

兔子腦素/腦尿肽(BNP)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  9,10-Bis(3,5-dihydroxyphenyl)anthracene  153715-08-3  中文名：9,10-雙(3,5-二羥苯基)蒽  分子式：C26H18O4 

兔子腦素/腦尿肽(BNP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  8-Phenyloctanol  10472-97-6  中文名：8-苯基辛醇  分子式：C14H22O  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

兔子腦素/腦尿肽(BNP)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝  1,4-Benzodioxane-6-carboxylic acid  中文名：1,4-苯并二氧六環(huán)-6-羧酸  分子式：C9H8O4  度：98.0%

兔子球蛋白M(IgM)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  8-Phenyloctanoic acid  26547-51-3  中文名：8-苯基辛酸  分子式：C14H20O2  度：98.0%  關(guān)鍵詞：
帶PCR檢測(cè)試劑盒說明書KDR Others Mouse 小鼠 VEGFR2 / Flk-1 / CD309 / KDR 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) L-天門冬氨酸質(zhì)量規(guī)格：>99%,BRL-Aspartic acid

小鼠肺大平滑肌細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mLL-天門冬氨酸(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：>99%(T),標(biāo)準(zhǔn)品L-Aspartic acid

CAL 27人舌鱗癌細(xì)胞 Human tongue squamous cell carcinoma cell line CAL 27 DMEM+10% FBSL-半胱胺酸鹽酸鹽無水物質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRL-Cysteine hydrochloride，anhydrous

IL36B Protein Human 重組人 IL36B / IL1F8 蛋白L-賴氨酸甲酯鹽酸鹽質(zhì)量規(guī)格：0.98L-Lysine methyl ester dihydrochloride

NCI-H446(人小細(xì)胞細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 COLO 205(細(xì)胞)L-蛋氨酸甲酯鹽酸鹽質(zhì)量規(guī)格：>98%L-Mine Methyl Ester Hydrochloride
PC-3 人細(xì)胞N-Debenzoyl-7-{[(2,2,2,-trichloroethyl)oxy]carbonyl}紫杉醇質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口N-Debenzoyl-7-{[(2,2,2,-trichloroethyl)oxy]carbonyl}paclitaxel

CL-0442SK-NEP-1(人腎母細(xì)胞瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×26α,3'-對(duì)二羥基紫杉醇質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口6α,3'-p-Dihydroxy Paclitaxel

人海馬神經(jīng)元7-差向 10-去乙酰基紫衫醇質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口7-Epi 10-Desacetyl Paclitaxel

人正常肝細(xì)胞;L-02 人平滑肌細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL(S,S)-帕洛諾司瓊鹽酸鹽-d4質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口(S,S)-Palonosetron Hydrochloride Labeled d4

人小氣道上皮細(xì)胞HSAEpiC2'-O-(2-甲氧乙基）腺苷質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口2'-O-(2-Methoxyethyl)adenosine
反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長(zhǎng)度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。