PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對(duì)表達(dá)量。

特點(diǎn)優(yōu)勢：
1. 特異性：馬泰勒梨形蟲PCR檢測試劑盒原說明書使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對(duì)，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達(dá)到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測菌的高靈敏檢測，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí)，可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實(shí)用性：檢測范圍廣，涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌，可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個(gè)檢測過程為3-4個(gè)小時(shí)。
5.   優(yōu)勢1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證，確保在使用過程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報(bào)告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

Androstanolone 17-benzoate  1057-07-4  中文名：雄諾龍苯甲酸酯  分子式：C26H34O3    人組織型纖溶酶原激活因子(tPA)酶聯(lián)吸附測定試劑盒   Human tPA (Plasminogen Activator, Tissue) ELISA Kit

Rosuvastain Calcium  147098-20-2  中文名：瑞舒伐他汀鈣  分子式：C22H28FN3O6S    人纖溶抑制因子(TAFI)酶聯(lián)吸附測定試劑盒   Human TAFI (Thrombin Activatable Fibrinolysis Inhibitor) ELISA Kit

Ambrisentan  177036-94-1  中文名：安倍生坦  分子式：C22H22N2O4    人纖維蛋白(FBL)酶聯(lián)吸附測定試劑盒   Human FBL (Fibrillarin) ELISA Kit

Propacetamol   66532-86-3  中文名：鹽酸丙帕他莫  分子式：C14H21ClN2O3    人生長激素受體(GHR)酶聯(lián)吸附測定試劑盒   Human GHR (Growth Hormone Receptor) ELISA Kit               

Pirfenidone  53179-13-8  中文名：哌非尼酮  分子式：C12H11NO    人組織多肽抗原(TPA)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝
兔子脫氫表雄酮酯(DHEA-S)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝  1-Allyl-3,5-Dimethylpyrazole  中文名：1-烯丙基-3,5-二甲基吡唑  分子式：C8H12N2  度：98.0%

兔子透明質(zhì)酸elisa試劑盒   兔子透明質(zhì)酸試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔子透明質(zhì)酸試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔子透明質(zhì)酸試劑盒、兔子透明質(zhì)酸eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  9-Hydroxy-α-lapachone  中文名：  分子式：C15H14O4  度：96.0%

兔子透明質(zhì)酸(HA)ELISAKit   ELISA.   96T/48T              9,9-Bis(4-hydroxyphenyl)fluorene  中文名：9,9-雙(4-羥苯基)芴  分子式：C25H18O2 

兔子髓0脂堿性蛋白elisa試劑盒   兔子髓0脂堿性蛋白試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔子髓0脂堿性蛋白試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔子髓0脂堿性蛋白試劑盒、兔子髓0脂堿性蛋白eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  9-Methoxy-α-lapachone  35241-80-6  中文名：  分子式：C16H16O4  度：%  關(guān)鍵詞：  梓; 萘醌; 中藥對(duì)照品; 中藥標(biāo)準(zhǔn)品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫

兔子髓0脂堿性蛋白(MBP)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  9-Oxooctadeca-10,12-dienoic acid  54232-58-5  中文名：  分子式：C18H30O3
馬泰勒梨形蟲PCR檢測試劑盒原說明書IL33 Protein Human 重組人 IL33 / Ierleukin-33 / NF-HEV 蛋白鹽酸諾拉曲噻質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng) Nolatrexed dihydrochloride

PC-3M-2B4(人低轉(zhuǎn)移細(xì)胞株) 5×106cells/瓶×2 CHO/dhFr-(中國倉鼠二氫葉酸還原酶缺陷細(xì)胞)PD 173074質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)PD 173074

CL-0253A-427(人細(xì)胞)5×106cells/瓶×2PH-797804質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)PH-797804

PGF Others Mouse 小鼠 PIGF / PLGF 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) Celite硅藻土，酸洗(用于總膳食纖維含量分析,TDF-100A)質(zhì)量規(guī)格：用于總膳食纖維含量分析,TDF-100ACelite, acid-washed

人膀胱平滑肌細(xì)胞cDNAHBdSMC cDNACelite® 硅藻土545(助濾劑,通量煅燒（filter aid,flux calcined）)質(zhì)量規(guī)格：助濾劑,通量煅燒（filter aid,flux calcined）Celite® 545
EFNA5 Others Human 人 EphrinA5 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (R)-(+)-氨魯米特質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口(R)-(+)-Aminoglutethimide

人食道上皮細(xì)胞總RNAHEEpiC NAS-(-)-氨魯米特L-1酸鹽質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口S-(-)-Aminoglutethimide L-Tartrate Salt

TNFRSF13C Others Rat 大鼠 BAFFR / TNFRSF13C 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) R-(+)-氨魯米特L-1酸鹽質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口R-(+)-Aminoglutethimide L-Tartrate Salt

敘利亞倉鼠腎細(xì)胞;BHK-212-羥基-氟他胺質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口2-Hydroxy-flutamide

PC-2細(xì)胞，人細(xì)胞 人細(xì)胞系,HS-4細(xì)胞 小鼠色素瘤瘤株;B16(S)-(-)-O-去甲卡維地洛質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口(S)-(-)-O-Desmethyl Carvedilol
反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。