PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對(duì)表達(dá)量。

特點(diǎn)優(yōu)勢(shì)：
1. 特異性：溶藻弧菌PCR檢測(cè)試劑盒直銷使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫(kù)的比對(duì)，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測(cè)，特異性均達(dá)到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)菌的高靈敏檢測(cè)，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí)，可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測(cè)，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實(shí)用性：檢測(cè)范圍廣，涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌，可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測(cè)，整個(gè)檢測(cè)過程為3-4個(gè)小時(shí)。
5.   優(yōu)勢(shì)1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢(shì)2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測(cè)試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證，確保在使用過程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽(yáng)性及假陰性報(bào)告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

Buergerinin G  263764-83-6  中文名：  分子式：C9H12O4    兔子神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子3(-3)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

(R,E)-Deca-2-ene-4,6-diyne-1,8-diol  931116-24-4  中文名：  分子式：C10H12O2    Rat serum total compleme (CH50) ELISA Kit 大鼠血清總補(bǔ)體(CH50)ELISA試劑盒

9,17-Octadecadiene-12,14-diyne-1,11,16-triol  211238-60-7  中文名：  分子式：C18H26O3    HumaerminalcomplemecomplexC5b-9,TCCC5b-9ELISAKit 人末端補(bǔ)體復(fù)合物C5b-9(TCCC5b-9)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

1-Acetoxy-9,17-octadecadiene-12,14-diyne-11,16-diol  213905-35-2  中文名：  分子式：C20H28O4    Humandeubiquitinatingenzyme,DUBELISA試劑盒人泛素分解酶(DUB)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

1,6-Dioxaspiro[4.5]decan-2-methanol  83015-88-7  中文名：  分子式：C9H16O3    組織MET激酶活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)20次
小鼠8異素(mouse 8-iso-PG)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  Benzyl carbamate  621-84-1  中文名：氨基甲酸芐酯  分子式：C8H9NO2 

小鼠8異素(8-iso-PG)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Benzidamine   中文名：鹽酸芐達(dá)明  分子式：C19H24ClN3O  度：98.0%

小鼠8異素   英文名稱：   8-isoprostane F2α   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   8-iso-PG  N6-Benzoyl-5'-O-(4,4'-dimethoxytrityl)-2'-deoxyadenosine  64325-78-6  中文名：N6-苯甲酰基-5'-O-(4,4'-二甲氧基三苯基)-2'-脫氧腺苷  分子式：C38H35N5O6 

小鼠8羥基脫氧鳥苷elisa試劑盒   小鼠8羥基脫氧鳥苷試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠8羥基脫氧鳥苷試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠8羥基脫氧鳥苷試劑盒、小鼠8羥基脫氧鳥苷eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  Benzalazine  中文名：二芐肼  分子式：C14H12N2  度：98.0%

小鼠8羥基脫氧鳥苷(8-OHdG)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝           Benzidamine   中文名：鹽酸芐達(dá)明  分子式：C19H24ClN3O
溶藻弧菌PCR檢測(cè)試劑盒直銷HFF細(xì)胞，小兒細(xì)胞 小鼠B細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞,SH2細(xì)胞 星形膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)基AM丁草胺標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=7%)質(zhì)量規(guī)格：10μg/ml,u=7%Butachlor solution

MCF 7B(人癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2炔草隆(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品Buturon

Ana-1(小鼠巨噬細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CM-R059大鼠膀胱平滑肌細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL 表達(dá)SV40T和EBNA1的人胚腎細(xì)胞;293ET丁苯威(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,99%Fenobucarb

CM-H079人微內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL唑螨酯(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.5%Fenpyroximate

Spike Others MERS-CoV 中東呼吸綜合征 MERS-CoV (HCoV-EMC/2012) Spike Protein S1 Protein (aa 1-725) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 精乙基噁唑禾草靈(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,97%Fenoxaprop-p-ethyl
T84(人腺癌肺轉(zhuǎn)移細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2特立氟胺質(zhì)量規(guī)格：>99%,二氫乳清酸脫氫酶(DHODH)抑制劑A771726 (Teriflunomide)

HBMEC-c 人類腦部微內(nèi)皮細(xì)胞(HBMEC) 500,000cells 腦微內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)當(dāng)歸酰基戈米辛H(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥96%,標(biāo)準(zhǔn)品Angeloylgomisin H

軟骨細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)美曲勃龍(R-1881)質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRMethyltrienolone

IL6ST Others Rat 大鼠 gp130 / IL6ST / CD130 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 克羅米通質(zhì)量規(guī)格：>97%,BRCrotamiton

PA317 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞L-延胡索乙素質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口L-Tetrahydropalmatine
反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長(zhǎng)度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。