產品全稱：TRAIL-R4 小鼠相關凋亡誘導配體4ELISA檢測試劑盒說明書
英文簡稱：TRAILR4 ELISA Kit
貨號：BKE6837
規格：48T/96T
服務：可提供免費代測服務，以及產品說明書和技術指導等
保存環境：2-8℃低溫、避光、防潮
主要成分：酶標板,試劑,標準品等。
檢測目的：用于測定血清，血漿及相關液體等樣本。例如適合檢測包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細胞培養上清、組織勻漿等標本..需要而未提供。

試劑配制：
1、酶聯板（Assay plate ）：一塊（96孔或者48孔）。
2、標準品（Standard）：2瓶（凍干品）。
3、樣品稀釋液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。
4、生物素標記抗體稀釋液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。
5、辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。
6、生物素標記抗體（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）
7、辣根過氧化物酶標記親和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）
8、底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。
9、濃洗滌液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10、終止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。
檢測流程圖：

注意事項：
1. TRAIL-R4 小鼠相關凋亡誘導配體4ELISA檢測試劑盒說明書使用前請保存在2-8℃。復溶后的標準品若未用完，請廢棄。
2. 微量試劑運輸中顛簸和可能的倒置，會使液體沾到管壁或瓶蓋。因此使用前請1000轉/分離心1分鐘，以使附著管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。
3. 從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結晶,屬于正常現象，微加熱至40℃使結晶完全溶解后再配制洗滌液。
（加熱溫度不要超過50℃）使用時洗滌液應為室溫。
4. 不同批號的試劑盒組份避免混用（洗滌液和反應終止液除外）。
5. 充分輕微混勻對反應結果尤為重要，zui好使用微量振蕩器(使用zui低頻率)，如無微量振蕩器，可在反應孵育前手工輕輕混勻。
6. 在試驗中標準品和樣本檢測時建議作雙孔檢測。
7. 試驗中所用的試管和吸頭均為一次性使用，嚴禁在不同的液體之間混用！否則將影響試驗結果。
8. 試驗中請穿著試驗服并帶乳膠手套做好防護工作。特別是檢測血液或者其他體液標本時，請按國家生物試驗室安全防護條列執行。

操作步驟：
1、準備：從冰箱取出試劑盒，室溫復溫平衡30分鐘。
2、配液：用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。
3、加標準品和待測樣本：取足夠數量的酶標包被板，固定于框架上，分別設置標準品孔、待測樣本孔和空白對照孔，記錄各孔位置，在標準品孔中加入標準品50μL；待測樣本孔中先加入待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL(即樣本稀釋5倍)；空白對照孔不加。
4、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。
5、洗板：棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板4次(也可用洗板機按說明書操作洗板)。
6、加酶標工作液：每孔加入酶標工作液50μL，空白對照孔不加。
7、溫育：重復4的操作。
8、洗板：重復5的操作。
9、顯色：每孔先加入顯色劑A 液50μL，再加入顯色劑B液 50μL，37℃避光顯色15min。
10、終止：取出酶標板，每孔加終止液50μL，終止反應(顏色由藍色立轉黃色)。
11、測定：以空白孔調零，在終止后15分鐘內，用450nm波長測量各孔的吸光值(OD值)。
12、計算：根據標準品的濃度及對應的OD值，計算出標準曲線的直線回歸方程，再根據樣本的OD值，在回歸方程上計算出對應的樣品濃度，也可以使用各種應用軟件來計算。zui終濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數。
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