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    上海帛科生物技術(shù)有限公司
       
       
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    M15(pREP4) 感受態(tài)細(xì)胞
    起訂量 (瓶)價(jià)格
    1-102350 /瓶
    ≥101250 /瓶
    • 品牌:帛科
    • 產(chǎn)地:進(jìn)口、國產(chǎn)
    • 貨號:BK-G63291
    • 發(fā)布日期: 2021-02-21
    • 更新日期: 2025-09-05
    產(chǎn)品詳請
    產(chǎn)地 進(jìn)口、國產(chǎn)
    保存條件 低溫冷藏
    品牌 帛科
    貨號 BK-G63291
    用途 產(chǎn)品僅用于科研
    組織來源 詳見說明書
    細(xì)胞形態(tài) 詳見說明書
    是否是腫瘤細(xì)胞
    CAS編號
    保質(zhì)期 詳見說明書
    器官來源 詳見說明書
    免疫類型 詳見說明書
    品系 詳見說明書
    生長狀態(tài) 詳見說明書
    物種來源 詳見說明書
    包裝規(guī)格 100ul*10 100ul*50
    純度 %
    是否進(jìn)口

    細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:

    一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
    1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
    2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
    3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
    二.細(xì)胞處理:
    1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。*天換液并檢查細(xì)胞密度。
    2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
    對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
    方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

    規(guī)格參數(shù):

    產(chǎn)品名稱:M15(pREP4) 感受態(tài)細(xì)胞
    規(guī)格 :100ul*10 100ul*50
    分類:表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞
    用途:生化試劑(用于科研試驗(yàn)研究)
    儲存條件: -70℃保存,必須加干冰運(yùn)輸。自收貨之日起液氮保存至少一年,-70℃保存至少6個(gè)月。
    外觀:(性狀) 干冰運(yùn)輸,單加10kg干冰費(fèi)
    單位: 袋

    注意事項(xiàng):


    1. 感受態(tài)細(xì)胞*在冰中緩慢融化,插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA,不可在冰中放置時(shí)間過長,長時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
    2. 混入質(zhì)粒或連接產(chǎn)物時(shí)應(yīng)輕柔操作。
    3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒或高效率的連接產(chǎn)物可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。
    同一批感受態(tài)細(xì)胞,用含目的片段的T載體質(zhì)粒轉(zhuǎn)化(陽性對照)能長出密密麻麻的菌落,而用另一種載體和目的片段的連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化,卻一個(gè)菌都沒長出來,重復(fù)了三次都這樣。請問這是感受態(tài)細(xì)胞的制作不過關(guān),還是連接出了問題?哪個(gè)可能性大些?
    答:應(yīng)該是連接的問題。所有連接反應(yīng)建議同時(shí)轉(zhuǎn)化酶切后的質(zhì)粒作為另一個(gè)陰性對照,確定酶切是否完全。同時(shí)連接前請確定質(zhì)粒和片段濃度達(dá)到最小連接量的要求。
    感受態(tài)細(xì)胞放到-80冰箱了有半年了,還能用來轉(zhuǎn)化質(zhì)粒嗎?
    答:如-80冰箱儲存過程中沒有發(fā)生凍融的情況,是可以用來轉(zhuǎn)化的,但是由于凍存時(shí)間過長,轉(zhuǎn)化效率會(huì)有所下降,如果用于普通的質(zhì)粒重轉(zhuǎn)或TA克隆等高效連接體系也是可以的,如珍貴的樣品請選用較為新鮮的感受態(tài)細(xì)胞。

    粘酸(>98%BC)Mucic acid質(zhì)量規(guī)格:>98%BC  小鼠型前膠原肽(PⅢNP)ELISA檢測試劑盒MouseN-terminalprocollagenⅢpropeptide,PⅢNPELISAKit 96T/48T  ELISAKitOH小鼠25羥基維生素D3規(guī)格:48T/96T

    碲標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/ml,基體:HCI)Tellurium standard質(zhì)量規(guī)格:100μg/ml,基體:HCI  人衣原體抗體(Cpn-Ab)試劑盒 Human Chlamydia pneumoniae aibody,Cpn-Ab ELISA Kit  ChickenIerferonβ,IFN-β/IFNBELISAKitβ干擾素(IFN-β/IFNB)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

    銩標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/mL,基體:10%HCL)Thulium standard質(zhì)量規(guī)格:1000μg/mL,基體:10%HCL  RatLeptin,LEPELISAKit大鼠瘦素(LEP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T  人基質(zhì)金屬蛋白酶10(MMP-10)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

    釩標(biāo)準(zhǔn)溶液(500mg/L,溶劑:水)Vanadium standard質(zhì)量規(guī)格:500mg/L,溶劑:水  COLLAGENII蛋白共沉淀分析試劑盒5  小鼠膽酯轉(zhuǎn)移蛋白(CETP)試劑盒 Mouse cholest erolester ansfer protein,CETP ELISA Kit

    Humanβ-Thromboglobulin,β-TGELISA試劑盒人β血小板球蛋白環(huán)蛋白(β-TG)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T  136849-88-2灰氈毛忍冬皂苷乙品牌  Macranthoidin B

    小鼠轉(zhuǎn)化生長因子α(TGF-α)ELISA試劑盒 ,英文名: TGF-α ELISA Kit  16830-15-2積雪草苷規(guī)格  Asiaticoside

    小鼠糖原1酸化酶同工酶II(GP-II)ELISA檢測試劑盒MouseGlycogenphosphorylaseII,GP-IIELISAKit 96T/48T  464-92-6積雪草酸  Asiatic acid

    人抗SSB/La抗體試劑盒 Human ai-SSB/La aibody ELISA Kit  6902-91-6吉馬酮說明書  Germacrone

    Rabbitβ-Thromboglobulin,β-TGELISAKit兔子β血小板球蛋白環(huán)蛋白(β-TG)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T  357-70-0加蘭他敏品牌  Galanthamine

    557-61-9二十八烷醇說明書  Octacosanol   豬血漿激肽釋放酶(KLKB1)試劑盒 Pig plasma kallikrein,KLKB1 ELISA Kit

    55750-84-0西紅花苷II說明書  Crocin II  豬血紅蛋白(Hb)試劑盒 Pig hemoglobin,Hb ELISA Kit

    55576-66-4仙鶴草酚B規(guī)格  Agrimol B  豬性因子/瑞斯托霉素輔因子(VWF)試劑盒 Pig von Willebrand Factor,vWF ELISA Kit

    555-66-86-姜烯酚  6-Shogaol   豬舒緩激肽(BK)試劑盒 Pig Bradykinin,BK ELISA Kit

    55481-88-4大葉茜草素規(guī)格  Rubimaillin   豬生成素受體Tie2(ANG-R-Tie2)ELISA檢測試劑盒Porcineangiopoietieceptoie2,ANG-R-Tie2ELISAkit 96T/48T

    M15(pREP4) 感受態(tài)細(xì)胞操作方法:

    1. DH5α感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA(質(zhì)粒或連接產(chǎn)物)并用手撥打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打),冰中靜置25分鐘。
    2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰中并靜置2分鐘,晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
    3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB),混勻后37℃,200 rpm復(fù)蘇60分鐘。
    4. 5000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

    5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作,將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時(shí)。

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