大鼠腸組織提取物實驗報告：
一、分離與培養：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，后將組織剪成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織完全被消化；
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；
5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
M1(小鼠白血病細胞)
M14(人黑色素瘤細胞)
MA-891(小鼠乳腺癌高轉移細胞)
MDA-MB-435(人乳腺癌高轉移細胞)
MDA-MB-468(人乳腺癌細胞)
MKN-28(人胃癌高轉移細胞)
MKN45(人胃癌細胞)
MuM-2B(人眼脈絡黑色素瘤細胞)
MuM-2C(人眼脈絡黑色素瘤細胞)
MV3(人黑色素瘤細胞)
MX-1(人乳腺癌細胞)
NCI-H1975(人肺腺癌細胞)
NCI-H460(人肺癌細胞)
NCI-H661(人大細胞肺癌細胞)
M-NFS-60 (小鼠白血病細胞G-CSF依賴性)
PA319(人大腸癌細胞)
PATU8988(人胰腺癌細胞)
PC-3M(人前列腺癌細胞)
SF-295(人XG惡性膠質瘤細胞)
SMC-1(人胸膜瘤細胞)
SW1116(人結腸腺癌細胞)
