大鼠原代子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞注意事項

大鼠原代子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞注意事項：

1.收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

2.收到細(xì)胞先不開瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時（視細(xì)胞密度而定）穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收細(xì)胞時就整體外觀拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下細(xì)胞狀態(tài)，100*，200*各一張），觀察記錄細(xì)胞在運輸過程中是否有污染情況。作為我方進(jìn)行銷售依據(jù)。

3.由于細(xì)胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊懀时竟局槐ＷC客戶收到細(xì)胞后一周內(nèi)的細(xì)胞狀態(tài)，故客戶需要售后時需出示收到細(xì)胞的時間證明及客戶提供收貨時間和發(fā)現(xiàn)問題后客服人員溝通的時間證明，期間間隔時間不能大于7天。

4.所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。續(xù)寫內(nèi)容：

5. 細(xì)胞復(fù)蘇后，建議先進(jìn)行低密度傳代（1:2或1:3），避免因運輸應(yīng)激導(dǎo)致細(xì)胞狀態(tài)不佳而影響后續(xù)實驗。傳代時需使用預(yù)溫的PBS輕柔洗滌，消化時間控制在1-2分鐘（視細(xì)胞貼壁情況調(diào)整），加入含血清的培養(yǎng)基終止消化后，輕柔吹打至單細(xì)胞懸液，離心后重懸接種。首次傳代后24小時內(nèi)避免頻繁移動培養(yǎng)瓶，以減少機械震動對細(xì)胞貼壁的影響。

6. 培養(yǎng)基更換頻率需根據(jù)細(xì)胞密度和代謝情況調(diào)整，通常每48小時更換一次。若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基迅速變黃（pH下降），可能提示細(xì)胞代謝旺盛或存在污染，需立即排查。建議使用原裝配套培養(yǎng)基，若自行配制，需確保添加了適宜濃度的生長因子（如EGF、胰島素等）及雙抗（青霉素-鏈霉素混合液）。

7. 凍存?zhèn)浞菔情L期實驗的重要保障。建議在細(xì)胞狀態(tài)最佳時（對數(shù)生長期，融合度80%-90%）進(jìn)行凍存，凍存液配方需含10%DMSO和90%胎牛血清，程序降溫后轉(zhuǎn)入液氮保存。每次凍存至少保留3管以上，并標(biāo)注清晰代次、日期及操作人信息。

8. 實驗人員需定期檢查培養(yǎng)箱參數(shù)（37℃、5% CO?、飽和濕度），尤其是CO?濃度波動可能導(dǎo)致培養(yǎng)基pH異常。若細(xì)胞出現(xiàn)空泡化、顆粒增多或增殖停滯，需排查支原體污染（建議每月用熒光染色法檢測一次），污染樣本應(yīng)立即滅菌廢棄，并對培養(yǎng)環(huán)境徹底消毒。